疾控中心检测实验室工作流¶
概述¶
疾控中心检测实验室工作流是以样本为核心，从样本采集出发，经过样本接收、前处理、检测实施、结果审核、报告出具的完整工作流程。本文涵盖登革热、基孔肯雅热、埃博拉病毒病和疟疾的检测流程。
工作流程总览¶
一、样本采集¶
1.1 样本类型总览（以样本为核心）¶
| 样本类型 | 适用病原体 | 采集要求 | 保存条件 |
|---|---|---|---|
| 全血 | 登革病毒、基孔肯雅病毒、疟原虫 | EDTA抗凝管 | 4℃，24h内检测 |
| 血清 | 登革病毒、基孔肯雅病毒、埃博拉病毒、疟原虫 | 促凝管/干燥管 | -20℃/-70℃ |
| 血浆 | 埃博拉病毒 | EDTA/枸橼酸钠抗凝 | -20℃/-70℃ |
| 咽拭子 | 埃博拉病毒（极期） | 专用采样拭子 | 4℃或病毒保存液 |
| 尿液 | 埃博拉病毒（恢复期） | 无菌容器 | 4℃ |
| 精液 | 埃博拉病毒（恢复期） | 无菌容器 | 4℃ |
| 乳汁 | 埃博拉病毒（恢复期） | 无菌容器 | 4℃ |
| 伊蚊 | 登革病毒、基孔肯雅病毒 | 液氮或-70℃ | -70℃ |
1.2 病原体检测项目总览（以病原体为核心）¶
| 病原体 | 危害等级 | 需采集样本 | 检测项目 | 生物安全要求 |
|---|---|---|---|---|
| 登革病毒 | 第三类 | 全血、血清、伊蚊 | NS1抗原、IgM/IgG抗体、核酸检测、病毒分离 | BSL-2 |
| 基孔肯雅病毒 | 第二类 | 全血、血清、伊蚊 | IgM/IgG抗体、核酸检测、病毒分离 | BSL-3（病毒培养） |
| 埃博拉病毒 | 第一类 | 血清、血浆、咽拭子、尿液、精液、乳汁 | 核酸检测、抗原检测、IgM/IgG抗体、病毒分离 | BSL-2（灭活）/BSL-4（病毒培养） |
| 疟原虫 | 第三类 | 全血、血清 | 血涂片镜检、抗原检测、核酸检测 | BSL-2 |
1.3 各类样本采集规范¶
血液样本¶
全血采集 - 容器：EDTA抗凝管（紫色头盖） - 采血量：成人3-5mL，儿童1-2mL - 用途：登革病毒/基孔肯雅病毒核酸检测、疟原虫镜检、血常规 - 注意事项：颠倒混匀8-10次，避免凝血
血清采集 - 容器：促凝管（红色头盖）或干燥管（黄色头盖） - 采血量：成人5-10mL，儿童2-5mL - 用途：登革病毒NS1抗原/抗体检测；基孔肯雅病毒抗体检测；埃博拉病毒抗原/抗体/核酸检测；疟原虫抗原/核酸检测 - 注意事项：室温静置30分钟待凝固后离心
血浆采集 - 容器：EDTA抗凝管（紫色头盖）或枸橼酸钠抗凝管（蓝色头盖） - 采血量：同血清 - 用途：埃博拉病毒核酸检测（急性期确诊金标准） - 注意事项：采集后立即混匀，4℃保存
呼吸道样本¶
咽拭子 - 采集部位：双侧扁桃体及咽后壁 - 采集方法：用拭子擦拭双侧扁桃体及咽后壁，避免触及舌面 - 保存：放入病毒保存液或4℃保存 - 用途：埃博拉病毒极期核酸检测（存在气溶胶传播风险，需加强防护）
泌尿生殖道样本¶
尿液 - 采集方法：清洁中段尿 - 保存：无菌容器，4℃保存 - 用途：埃博拉病毒恢复期核酸检测（病毒可持续存在）
精液 - 采集方法：患者自行采集 - 保存：无菌容器，4℃保存 - 用途：埃博拉病毒恢复期检测（男性幸存者康复后3个月仍可检出病毒）
乳汁 - 采集方法：无菌采集 - 保存：无菌容器，4℃保存 - 用途：埃博拉病毒恢复期检测（存在母婴传播风险）
媒介生物¶
伊蚊 - 采集方法：诱蚊灯法或人诱法 - 保存：液氮速冻后-70℃保存 - 用途：登革病毒、基孔肯雅病毒核酸检测
二、样本运输与接收¶
2.1 运输要求¶
| 病原体 | 危害等级 | 运输包装 | 运输条件 |
|---|---|---|---|
| 埃博拉病毒 | 第一类 | A类包装（UN2814） | 三重包装系统，专人闭环路线 |
| 基孔肯雅病毒 | 第二类 | A类包装（UN2814） | 三重包装系统，需准运证 |
| 登革病毒 | 第三类 | B类包装（UN3373） | 三层包装 |
| 疟原虫 | 第三类 | B类包装（UN3373） | 三层包装 |
2.2 样本接收¶
- 接收时间：工作时间内随时接收
- 接收人员：实验室指定人员
- 接收要求：
- 核对样本信息与送检单是否一致
- 检查样本包装是否完整
- 确认样本保存条件是否符合要求
- 检查样本数量是否与送检单一致
- 埃博拉病毒样本：核对灭活记录和灭活效果验证报告（仅接收灭活样本）
2.3 样本登记¶
- 登记内容：
- 样本编号
- 患者信息（姓名、性别、年龄、联系方式）
- 临床诊断
- 采样时间
- 送检单位
- 检测项目
- 登记方式：实验室信息管理系统（LIMS）或纸质登记
三、样本前处理¶
3.1 血液样本处理¶
血清分离 1. 采集后室温静置30分钟（促凝管）或15分钟（干燥管） 2. 3000rpm离心10分钟 3. 分离血清至无菌冻存管 4. 标记样本编号、日期 5. 根据检测时间选择保存条件
血浆分离 1. 采集后立即颠倒混匀 2. 3000rpm离心10分钟 3. 分离血浆至无菌冻存管 4. 标记、保存
全血处理 1. 采集后立即颠倒混匀 2. 4℃保存，24小时内检测
血涂片制作（疟疾） 1. 用一次性采血针在耳垂或指端采血（婴儿可从拇趾或足跟采血） 2. 涂制薄血膜和/或厚血膜 3. 厚血膜：直径0.8cm～1cm的圆形 4. 薄血膜：舌状，宽约2cm
3.2 埃博拉病毒样本灭活¶
重要提示：埃博拉病毒为第一类病原微生物，BSL-2实验室仅限处理灭活后的样本
热灭活（推荐） - 温度：60℃ - 时间：1小时 - 适用样本：血清、血浆、全血
核酸提取灭活 - 使用含胍盐裂解液的核酸提取试剂盒 - 核酸提取过程本身可实现病毒灭活
3.3 媒介生物处理¶
伊蚊处理 1. 形态学鉴定分类 2. 按采集地点分装，每管10-20只 3. 加入无菌生理盐水或PBS 4. 研磨匀浆 5. 4℃ 8000g离心10分钟 6. 取上清用于检测
四、以样本为核心的检测项目¶
4.1 血液/血清/血浆样本¶
登革病毒检测¶
| 检测项目 | 检测方法 | 适用时间 | 生物安全级别 |
|---|---|---|---|
| NS1抗原 | ELISA/胶体金 | 发病后5天内 | BSL-2 |
| IgM抗体 | ELISA | 发病后5天可检出 | BSL-2 |
| IgG抗体 | ELISA/IFA | 发病1-2周后可检出 | BSL-2 |
| 核酸 | RT-PCR | 发病前1-3天至发病后5天 | BSL-2 |
| 病毒分离 | 细胞培养（C6/36、BHK21、Vero） | 发病5天内 | BSL-2 |
基孔肯雅病毒检测¶
| 检测项目 | 检测方法 | 适用时间 | 生物安全级别 |
|---|---|---|---|
| IgM抗体 | ELISA | 发病后数天可检出 | BSL-2 |
| IgG抗体 | ELISA | 发病1-2周后可检出 | BSL-2 |
| 核酸 | RT-PCR | 发病后7天内 | BSL-2 |
| 病毒分离 | 细胞培养 | 发病7天内 | BSL-3 |
埃博拉病毒检测¶
| 检测项目 | 检测方法 | 适用时间 | 生物安全级别 |
|---|---|---|---|
| 核酸 | RT-PCR | 急性期（确诊金标准） | BSL-2（灭活） |
| 抗原 | ELISA | 急性期（早期快速筛查） | BSL-2（灭活） |
| IgM抗体 | ELISA | 近期感染 | BSL-2（灭活） |
| IgG抗体 | ELISA/IFA | 恢复期阳转或4倍升高 | BSL-2（灭活） |
| 病毒分离 | 细胞培养（Vero） | 急性期 | BSL-4 |
疟原虫检测¶
| 检测项目 | 检测方法 | 适用时间 | 生物安全级别 |
|---|---|---|---|
| 血涂片镜检 | 吉氏染色/瑞氏染色+光学显微镜 | 发热期（金标准） | BSL-2 |
| 抗原检测 | 快速检测试剂盒（免疫层析法） | 发热期 | BSL-2 |
| 核酸检测 | PCR | 发热期 | BSL-2 |
疟原虫镜检要点：以检查厚血膜为主，薄血膜主要用于虫种鉴别。根据疟原虫形态确定恶性疟、间日疟、三日疟、卵形疟或混合感染。
4.2 咽拭子样本¶
埃博拉病毒检测¶
| 检测项目 | 检测方法 | 适用时间 | 生物安全级别 |
|---|---|---|---|
| 核酸 | RT-PCR | 极期（存在气溶胶风险） | BSL-2（灭活） |
注意：咽拭子采集存在气溶胶传播风险，采集人员需佩戴全面型自吸过滤式呼吸器或动力送风呼吸器
4.3 尿液/精液/乳汁样本¶
埃博拉病毒检测（恢复期）¶
| 检测项目 | 检测方法 | 样本类型 | 生物安全级别 |
|---|---|---|---|
| 核酸 | RT-PCR | 尿液、精液、乳汁 | BSL-2（灭活） |
注意：男性幸存者康复后3个月仍可从精液中检出埃博拉病毒，解除隔离后12个月内需定期检测
4.4 媒介生物样本¶
登革病毒检测¶
| 检测项目 | 检测方法 | 样本类型 | 生物安全级别 |
|---|---|---|---|
| 核酸 | RT-PCR | 伊蚊 | BSL-2 |
| 病毒分离 | 细胞培养 | 伊蚊 | BSL-2 |
基孔肯雅病毒检测¶
| 检测项目 | 检测方法 | 样本类型 | 生物安全级别 |
|---|---|---|---|
| 核酸 | RT-PCR | 伊蚊 | BSL-2 |
| 病毒分离 | 细胞培养 | 伊蚊 | BSL-3 |
五、检测结果判读¶
5.1 核酸检测（RT-PCR）¶
- 阳性：Ct值≤35，且扩增曲线典型
- 阴性：Ct值>35或无扩增
- 可疑：Ct值在35-40之间，需复检
5.2 抗原检测¶
- 阳性：出现质控线和检测线（胶体金）或S/CO≥1.0（ELISA）
- 阴性：仅出现质控线（胶体金）或S/CO<1.0（ELISA）
- 无效：质控线未出现
5.3 抗体检测¶
- IgM阳性：提示近期感染
- IgG阳转：恢复期血清IgG抗体阳转，具有回顾性诊断价值
- IgG 4倍升高：恢复期IgG抗体滴度较急性期呈4倍及以上升高
5.4 疟原虫镜检¶
- 阴性：查完整个厚血膜未查见疟原虫
- 阳性：查见疟原虫，根据形态确定虫种
- 虫种鉴别：根据被寄生红细胞大小、特征性斑点、疟色素等形态特征鉴别
六、结果审核与报告¶
6.1 结果审核¶
- 审核人员：实验室负责人或授权签字人
- 审核内容：
- 检测方法是否正确
- 操作过程是否规范
- 结果判读是否准确
- 质控结果是否在控
6.2 报告出具¶
- 报告内容：
- 样本信息
- 检测项目
- 检测方法
- 检测结果
- 参考范围
- 检测日期
- 检测人员
- 审核人员
- 报告形式：纸质报告和/或电子报告
- 报告时限：
- 抗原检测：1小时内出具报告
- 核酸检测：12小时内出具报告
- 血涂片镜检：2小时内出具报告
6.3 结果上报¶
- 登革热/基孔肯雅热/疟疾：阳性结果按规定上报传染病报告信息管理系统
- 埃博拉病毒病：
- 留观病例、疑似病例和确诊病例2小时内网络直报
- 疾病名称选择"其他传染病"中的"埃博拉病毒病"
- 确诊病例还应通过突发公共卫生事件信息系统报告
七、样本保存与处置¶
7.1 阳性样本保存¶
- 保存要求：所有阳性样本需在采样后1个月内送市疾控中心
- 保存条件：-70℃或以下保存
- 保存数量：每份血清样本分装为2管，每管不少于1mL
7.2 阴性样本保存¶
- 保存时间：根据实验室规定，通常保存1-2年
- 保存条件：-20℃或-70℃保存
7.3 样本销毁¶
- 销毁条件：超过保存期限或无保存价值
- 销毁方式：高压灭菌后按医疗废物处理
- 销毁记录：记录销毁时间、数量、方式
八、质量控制¶
8.1 室内质控¶
- 阴性对照：每批次检测设置阴性对照
- 阳性对照：每批次检测设置阳性对照
- 质控判定：阴性对照阴性，阳性对照阳性，检测有效
8.2 室间质评¶
- 参加频次：每年参加省级或国家级室间质评
- 评价标准：成绩合格，无重大偏差
- 改进措施：对不合格项目进行原因分析和改进
九、生物安全¶
9.1 个人防护¶
| 病原体 | 危害等级 | 防护要求 |
|---|---|---|
| 登革病毒 | 第三类 | 工作服、手套、口罩、护目镜 |
| 基孔肯雅病毒 | 第二类 | 工作服、手套、口罩、护目镜 |
| 埃博拉病毒 | 第一类 | 医用防护服、双层手套、医用防护口罩、防护面屏/护目镜、防水靴套 |
| 疟原虫 | 第三类 | 工作服、手套、口罩 |
9.2 实验室级别要求¶
| 病原体 | 危害等级 | 病毒培养 | 未培养感染材料 | 灭活材料 |
|---|---|---|---|---|
| 埃博拉病毒 | 第一类 | BSL-4 | BSL-3 | BSL-2 |
| 基孔肯雅病毒 | 第二类 | BSL-3 | BSL-2/BSL-3 | BSL-2 |
| 登革病毒 | 第三类 | BSL-2 | BSL-2 | BSL-2 |
| 疟原虫 | 第三类 | - | BSL-2 | BSL-2 |
9.3 消毒处理¶
- 物体表面：1000-2000mg/L含氯消毒液擦拭
- 埃博拉病毒污染：5000-10000mg/L含氯消毒液
- 密闭场所终末消毒：500mg/L二氧化氯或3%过氧化氢喷雾
相关概念¶
- 登革热 - 登革病毒感染疾病
- 基孔肯雅热 - 基孔肯雅病毒感染疾病
- 埃博拉病毒病 - 埃博拉病毒感染疾病
- 疟疾 - 疟原虫感染疾病
- 核酸检测 - 分子诊断方法
- 抗原检测 - 快速检测方法
- 血清学检测 - 抗体检测方法
- 病毒培养分离 - 病毒分离方法
- 重庆市登革热基孔肯雅热实验室检测方案 - 具体检测规范
- 埃博拉病毒病诊疗方案（2026年版） - 埃博拉临床诊疗规范
- 二级生物安全实验室检测埃博拉病毒病方案 - BSL-2检测埃博拉方案
- 疟疾诊断标准（WS 259-2015） - 疟疾诊断规范
参考标准¶
- 《人间传染的病原微生物目录》
- 《重庆市登革热和基孔肯雅热实验室检测方案（2026版）》
- 《病原微生物实验室生物安全管理条例》
- 《埃博拉病毒病诊疗方案（2026年版）》
- 《埃博拉病毒病防控方案（2026年版）》
- WS 259-2015《疟疾的诊断》