Chongqing dengue chikungunya lab testing 2026
重庆市登革热和基孔肯雅热
实验室检测方案（2026版）
为指导全市各级医疗机构、疾控机构和相关实验室检测机构开展登革热和基孔肯雅热实验室检测工作，规范检测程序，提高检测质量，制定本方案。
一、检测对象
登革热和基孔肯雅热疑似病例、临床诊断病例和确诊病例，风险区域发热病例、共同暴露人群及专项调查人群，媒介伊蚊等。
二、样本采集、保存和运输
（一）样本采集。
1.人体血清样本。
（1）病例急性期血清。用无菌真空干燥管，采集患者非抗凝血5mL，及时分离血清，分装3份保存于做好标记的、带螺旋盖、内有垫圈的耐-70℃的2mL规格无菌冻存管内。
（2）病例恢复期血清。用无菌真空干燥管，采集患者发病7天后非抗凝血5ml，及时分离血清，分装3份保存于做好标记的、带螺旋盖、内有垫圈的耐-70℃的2mL规格无菌冻存管内。采集时间与急性期血清间隔时间不少于3天。
3管分装的血清样本，1管用于检测，另2管送市疾控中心进行后续检测、病毒分离等。送市疾控中心的血清样本，每管不少于1mL。
2.蚊媒样本。
采集登革热、基孔肯雅热流行季节早晚活动高峰伊蚊，分类鉴定后，填写媒介伊蚊样本采集信息表，按照采集地点分装，每管10-20只，低温保存。
（二）样本保存。
1.血清样本
24小时内检测的样本可置于4-8℃环境中保存，1周内检测的样本应置于-20℃环境中保存，需长期使用的样本应置于-70℃或以下环境中保存。
2.蚊媒样本
用于病原检测的蚊媒样本应置于-70℃及以下环境或液氮中保存，无此保存条件的实验室可在-20℃环境中保存不超过1周。
（三）样本运输。
按照《人间传染的病原微生物目录》对运输包装分类的有关要求，登革病毒的危害程度属于第三类病原微生物，血清和伊蚊标本应采用B类包装（编号：UN3373）。基孔肯雅病毒的危害程度属于第二类病原微生物，血清和伊蚊标本应采用A类包装（编号：UN2814）。样本运输时应遵守国家和重庆市相关生物安全规定，采用低温运输，避免反复冻融。
基孔肯雅样本运输前应办理准运证。
医疗机构采集的非抗凝血样本应立即送检，实验室收到样本后，尽快完成检测，抗原检测1小时内完成，核酸检测12小时内完成。
各区县辖区内二级以上医疗机构实验室应开展登革热血清抗原检测、登革和基孔肯雅抗体检测，有条件的可开展登革和基孔肯雅核酸检测工作。
本地首发病例和可疑病例送当地疾控机构实验室复核，疫情流行期间，由医疗和疾控机构共同负责辖区内样本的检测和结果报送。
三、病例实验室检测
初次感染登革病毒患者，发病前1～3天至发病后5天左右为病毒血症期，此期间采集的样本可开展登革病毒核酸检测、抗原检测及病毒培养分离；一般发病后5天可检出IgM抗体，发病2周后达到高峰，可维持2～3月;发病1～2周后可检出IgG抗体，IgG抗体可维持数年甚至终生。登革病毒IgM抗体检测阳性提示新近感染登革病毒，适用于登革热早期诊断，发病1周内检出高水平登革病毒IgG抗体，提示二次感染。但需要鉴别登革病毒与其他黄病毒属病毒存在的交叉反应。
初次感染基孔肯雅病毒患者，一般发病后7天内血液样本病毒核酸检出率较高，发病后5天内血液样本病毒培养分离率较高。
（一）病原学。
1.抗原检测。登革病毒常用NS1抗原检测，一般发病后5天内血液样本中NS1抗原检出率高，适用于现场快速检测，可用于早期诊断。
2.核酸检测。常采用实时荧光RT-PCR方法进行。用于登革病毒、基孔肯雅病毒早期诊断和登革病毒血清分型。境外输入病例应尽量全部采集样本。省外输入病例和本地病例按以下要求采集：当病例数量少于20例时，应尽量全部采集；介于20-100例之间时，采集样本数不低于20例；超过100例时，采集样本数不低于病例数的20％。
3.病毒培养分离。一般登革热发病5天内，基孔肯雅热发病7天内血液样本病毒培养分离率较高，通常将样本接种至蚊源细胞（C6/36）或哺乳动物细胞（BHK21、Vero）中进行培养与分离，待其出现病变特征后，采用抗原或核酸检测手段鉴定病毒种类。
4.基因组序列分析。采用一代Sanger法或扩增子技术对登革病毒E基因、全基因组测序，对基孔肯雅病毒E2、E1基因和全基因组测序，测序技术经质控合格后，方可用于后续生物信息分析。优先选择与登革病毒、基孔肯雅病毒标准株、基因型明确以及分离日期和地区信息完整的病毒株基因组序列进行比较分析。二代测序平台覆盖深度应不低于10×，三代测序平台覆盖深度应不低于50×，全基因组测序覆盖度应不低于99%。
登革热选择不少于10%的核酸检测阳性样本开展E蛋白编码基因序列或全基因组测定和分析，阳性样本优先选取首例本地病例、指示病例、重症病例和死亡病例。对用于查明疫情性质和波及范围的聚集性病例核酸检测阳性标本开展病毒全基因组序列测定和分析。对同一传播链或流行病学关系明确的病例无需全部测序。
基孔肯雅热选择不少于20%的核酸检测阳性样本开展病毒E2和E1蛋白编码基因序列或全基因组序列测定和分析。登革热、基孔肯雅热本地传播疫情样本选择，应兼顾不同时段、不同地区样本，优先选取首例本地病例样本。对同一传播链或流行病学关系明确的病例无需全部测序。
有测序仪的区县疾病预防控制中心在市疾病预防控制中心指导下自行开展测序，测序完成后及时将序列上报市疾病预防控制中心微生物检测所，并及时上传至“病毒病病原监测预警系统”（https://www.ivdcvma.cn）；没有测序仪的区县疾病预防控制中心可将样本送其他具备测序仪的疾病预防控制中心或市疾病预防控制中心进行检测，得到的序列上报市疾病预防控制中心微生物检测所，并及时上传至“病毒病病原监测预警系统”（https://www.ivdcvma.cn）。
微生物检测所负责收集全市的登革病毒序列数据。
（二）血清学。
1.特异性IgM抗体。采用ELISA、免疫层析等方法检测，是辅助诊断登革热/基孔肯雅热急性期或近期感染的重要指标。
2.特异性IgG抗体。采用ELISA、免疫荧光（IFA）、免疫层析等方法检测。登革热/基孔肯雅热患者恢复期血清IgG抗体阳转或滴度较急性期呈4倍及以上升高可以确诊。
3.中和抗体。采用空斑减少中和实验、微量中和实验等方法检测，可用于分型。登革热/基孔肯雅热患者恢复期血清中和抗体阳转或滴度较急性期呈4倍及以上升高可以确诊。
四、蚊媒实验室检测
向分类分装后的蚊媒样本保存管中加入无菌生理盐水冲洗 2 次，再将成蚊或幼虫转移至研磨器或组织破碎仪，加入1mL 4℃预冷的无菌生理盐水或PBS或病毒培养液研磨后，于4℃ 8000g离心10分钟，取上清液用于核酸检测。病毒核酸检测阳性的样本送市疾病预防控制中心微生物检测所。蚊媒核酸检测、病毒分离培养和基因组序列分析的检测方法同病例检测。
五、复核检测及样本保存
市疾控中心对各县的登革热/基孔肯雅热首发本地病例进行复核。前三年内市疾控中心已复核过本地登革热/基孔肯雅热的区县，当年本地首例病例无需市疾控中心复核。
当年所有登革/基孔肯雅阳性样本都需在采样后1个月内送市疾控中心，上级部门有要求的，按上级部门要求执行；送市疾控中心的每份血清样本分装为2管，且每管不少于1mL。
基孔肯雅样本运送前需要办理准运手续。
六、结果报送和反馈
各区县医疗机构或疾病预防控制中心实验室收到样本后，尽快完成检测，抗原检测1小时内完成，核酸检测12小时内完成，并及时反馈结果。
七、生物安全
登革热和基孔肯雅热实验室检测应按照《人间传染的病原微生物目录》规定要求开展，做好生物安全工作。
登革病毒培养分离、未经培养的感染材料的操作在生物安全二级实验室进行、动物感染实验在动物生物安全二级实验室进行。
基孔肯雅病毒培养分离在生物安全三级实验室进行、未经培养的感染材料的操作在生物安全二级实验室进行、动物感染实验在动物生物安全三级实验室进行。